Cell Direct RT qPCR Kit — SYBR GREEN I Прямой лизис клеток Cell Ready Наборы для одноэтапной RT-PCR
Описания
В этом наборе используется уникальная буферная система для лизиса, которая может быстро высвобождать РНК из культивируемых образцов клеток для реакций RT-qPCR, тем самым устраняя трудоемкий и трудоемкий процесс очистки РНК.Матрицу РНК можно получить всего за 7 минут.5×Прямой микс RT и 2×Реагенты Direct qPCR Mix-SYBR, входящие в комплект, позволяют быстро и эффективно получать количественные результаты ПЦР в реальном времени.
5×Прямой микс RT и 2×Прямая qPCR Mix-SYBR обладает высокой устойчивостью к ингибиторам, и лизат образцов можно использовать в качестве матрицы для RT-qPCR напрямую.Этот набор содержит уникальную высокоаффинную обратную транскриптазу РНК Foregene и ДНК-полимеразу Hot D-Taq, dNTPs, MgCl.2, реакционный буфер, оптимизатор ПЦР и стабилизатор.
Технические характеристики
200×20μл Rxns, 1000×20μл Rxns
Компоненты комплекта
| Часть I | Буфер CL |
| Фореген Протеаза Плюс II | |
| Буфер СТ | |
| Часть II | Ластик ДНК |
| 5 × Прямая RT Микс | |
| 2 × Прямая кПЦР Mix-SYBR | |
| 50× Эталонный краситель ROX | |
| ddH2O без РНКазы | |
| инструкции | |
Особенности и преимущества
■Просто и эффективно: с технологией Cell Direct RT образцы РНК можно получить всего за 7 минут.
■ Потребность в образцах невелика, можно протестировать всего 10 ячеек.
■ Высокая производительность: он может быстро обнаруживать РНК в клетках, культивируемых в 384-, 96-, 24-, 12- и 6-луночных планшетах.
■ DNA Eraser может быстро удалить высвободившиеся геномы, что значительно снизит влияние на результаты последующих экспериментов.
■ Оптимизированная система RT и qPCR делает двухэтапную обратную транскрипцию RT-PCR более эффективной, а PCR более специфичной и более устойчивой к ингибиторам реакции RT-qPCR.
Применение комплекта
Область применения: культивируемые клетки.
- РНК, высвобождаемая при лизисе образца: применимо только к шаблону RT-qPCR этого набора.
- Набор можно использовать для следующих целей: анализ экспрессии генов, проверка эффекта сайленсинга генов, опосредованного siRNA, скрининг лекарств и т. д.
Диаграмма
Хранение и срок годности
Часть I этого комплекта следует хранить при температуре 4 ℃;Часть II следует хранить при температуре -20 ℃.
Foregene Protease Plus II следует хранить при температуре 4℃, не замерзать при -20 ℃.
Реагент 2×Прямая qPCR Mix-SYBR должна храниться при -20℃во тьме;при частом использовании его также можно хранить на 4℃ для кратковременного хранения (израсходовать в течение 10 дней).
Принципы разработки праймеров для ПЦР в реальном времени
Прямой праймер и обратный праймер
Для ПЦР в реальном времени очень важен дизайн праймера.Праймеры связаны со специфичностью и эффективностью ПЦР-амплификации и могут быть разработаны с учетом следующих принципов:
Длина праймера: 18-30 п.н.
Содержание GC: 40-60%.
Значение Tm: Программное обеспечение для проектирования праймеров, такое как Primer 5, может указать значение Tm праймера.Значения Tm восходящего и нисходящего праймеров должны быть как можно ближе.Также можно использовать формулу расчета Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).При проведении ПЦР в качестве температуры отжига обычно выбирается температура ниже значения Tm праймера, равного 5 °C (соответствующее повышение температуры отжига может повысить специфичность реакции ПЦР).
Праймеры и продукты ПЦР:
Длина продукта ПЦР-амплификации праймеров дизайна предпочтительно составляет 100-150 п.н.
По возможности следует избегать применения грунтовок для дизайна во вторичной структурной области шаблона.
Избегайте образования 2 или более комплементарных оснований между 3'-концами вышестоящего и нижестоящего праймеров.
3'-концевое основание праймера не может содержать 3 дополнительных последовательных G или C.
Сами праймеры не могут иметь комплементарных структур, иначе будет образовываться шпилечная структура, влияющая на ПЦР-амплификацию.
ATCG должен быть распределен как можно более равномерно в последовательности праймера, и следует избегать 3'-концевого основания в виде T.
Приложение 1：Дополнительный пакет компонентов Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Раствор для лизиса клеток
|
| |||
| Компоненты комплекта (24-луночная система лизиса/лунка) | ДРТ-01011-А1 | ДРТ-01011-А2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| Частья | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Фореген Протеаза Плюс II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ЧастьII | Ластик ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
2. RT Микс
|
| |
| Компоненты комплекта (20 мкл реакционной системы) | ДРТ-01011-В1 |
| 200 т | |
| 5 × Прямая RT Микс | 800 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл × 2 |
|
| ||
| Компоненты комплекта (20 мкл реакционной системы) | ДРТ-01011-C1 | ДРТ-01011-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2 × Прямая кПЦР Mix-SYBR | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 50× Эталонный краситель ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл |
Инструкции по эксплуатации:
