Набор для выделения общей РНК из клеток Наборы для выделения общей РНК из клеток
Описание комплекта:
Высокоочищенную и качественную тотальную РНК можно получить из различных культивируемых клеток за 11 минут.
без РНКаз
Работает при комнатной температуре (15-25 ℃)
С колонкой для очистки ДНК
Высокий выход РНК
Быстро: завершите извлечение за 11 минут.
Безопасность:Нет Органические химические вещества
Описание
В этом наборе используются спин-колонка и формула, разработанная Foregene, которая позволяет эффективно извлекать высокоочищенную и высококачественную тотальную РНК из клеток, культивируемых в 96-, 24-, 12- и 6-луночных планшетах.
Набор содержит эффективную колонку для очистки ДНК, которая может легко отделить супернатант и клеточный лизат, а также связать и удалить геномную ДНК.Операция проста и экономит время.
TКолонка только для РНК может эффективно связывать РНК с уникальной формулой.Одновременно можно обрабатывать большое количество образцов.
Компоненты комплекта
| Состав комплекта | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 т | 200 т | |
| Буфер cRL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер cRL2 | 15 мл | 60 мл |
| Буфер RW1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RW2 | 24 мл | 96 мл |
| ddH2O без РНКазы | 10 мл | 40 мл |
| Колонка только для РНК | 50 | 200 |
| Колонка для очистки ДНК | 50 | 200 |
| Инструкция | 1 | 1 |
*Пожалуйста, надевайте перчатки и принимайте защитные меры во время работы, так как Buffer cRL1 и Buffer RW1 содержат раздражающие хаотропные соли.
Особенности и преимущества
■ Весь процесс осуществляется при комнатной температуре (15-25℃), без ледяной бани и низкотемпературного центрифугирования.
■ Весь набор не содержит РНКаз, поэтому не нужно беспокоиться о деградации РНК.
■ Колонка для очистки ДНК специфически связывает ДНК, поэтому набор может удалить загрязнение геномной ДНК без добавления дополнительной ДНКазы.
■ Высокий выход РНК: колонка только для РНК и уникальная формула позволяют эффективно очищать РНК.
■ Высокая скорость: прост в эксплуатации и может быть выполнен за 11 минут.
■ Безопасность: не требуется никаких органических реагентов.
■ Высокое качество: очищенная РНК имеет высокую степень чистоты, не содержит белков и других примесей и может использоваться в различных последующих экспериментах.
Применение комплекта
Он подходит для выделения и очистки тотальной РНК из культивируемых клеток в 96-, 24-, 12- и 6-луночных планшетах.
Рабочий процесс
Диаграмма
Диаграмма батареи агарозного геля из комплекта для выделения общей РНК клеток, обработанного вышеуказанным различным количеством клеток, объем элюирования 20 мкл, взятие 2 мкл очищенной общей РНК 1%.
Хранение и срок годности
Набор можно хранить в течение 12 месяцев при комнатной температуре (15–25 ℃) или более длительное время при 2–8 ℃ (24 месяца).
Буфер cRL1 можно хранить при 4 ℃ в течение 1 месяца после добавления 2-гидрокси-1-этантиола (необязательно).
РНК не экстрагируется или выход РНК низкий
Часто существует множество факторов, влияющих на эффективность извлечения, например: содержание РНК в образце ткани, метод операции, объем элюции и т. д.
1. Во время работы проводили ледяную баню или криогенное (4 °C) центрифугирование.
Рекомендация: Работать при комнатной температуре (15-25°С) на протяжении всего процесса, не использовать ледяную баню и центрифугировать при низких температурах.
2. Неправильное хранение проб или чрезмерное время хранения проб.
Рекомендация: Храните образцы при температуре -80 °C или замораживайте в жидком азоте и избегайте многократного замораживания-оттаивания;попробуйте использовать свежие ткани или культивированные клетки для выделения РНК.
3. Недостаточный лизис образца.
Рекомендация: при гомогенизации ткани убедитесь, что ткань достаточно гомогенизирована, а клетки ткани достаточно расщеплены, чтобы объяснить высвобождение РНК.
4. Неправильно добавлен элюент.
Рекомендация: Подтвердите, что ddH не содержит РНКазы.2О добавляют по каплям в середину мембраны очистительной колонны.
5. В буфер RL2 или буфер RW2 был добавлен неправильный объем абсолютного этанола.
Рекомендация: Следуйте инструкциям, добавьте правильный объем абсолютного этанола в буфер RL2 и буфер RW2 и хорошо перемешайте перед использованием набора.
6. Неправильная дозировка образца ткани.
Рекомендация: используйте 10–20 мг ткани или (1–5) × 106клеток на 500 мкл буфера RL1, так как чрезмерное использование тканей может привести к снижению выделения РНК.
7. Неправильный объем элюции или неполная элюция.
Рекомендация: объем элюции очистительной колонки 50-200 мкл;если эффект элюирования неудовлетворителен, рекомендуется увеличить время помещения при комнатной температуре после добавления предварительно нагретой ddH без РНКазы.2О, например, в течение 5-10 мин.
8. После промывки буфером RW2 в очистной колонке остается этанол.
Рекомендация: при наличии остатка этанола после промывки буфером RW2, центрифугирование пустой пробирки в течение 1 мин, время операции центрифугирования пустой пробирки можно увеличить до 2 мин, или колонку для очистки можно поместить при комнатной температуре на 5 мин для адекватного удаления остаточного этанола.
Очищенная РНК деградирует
Качество очищенной РНК зависит от таких факторов, как сохранность образца, загрязнение РНКазой, манипуляции и т. д.
1. Образцы тканей не хранятся вовремя.
Рекомендация: Если образцы ткани или клетки не используются своевременно после сбора, немедленно заморозьте их при температуре -80 °C или в жидком азоте.Для выделения РНК по возможности используйте только что взятый образец ткани или клетки.
2. Повторное замораживание-оттаивание образцов тканей.
Рекомендация: при хранении образцов тканей лучше всего разрезать их на мелкие кусочки для сохранения и удалять один из кусочков при использовании, чтобы избежать повторного замораживания-оттаивания образца и деградации РНК.
3. РНКаза введена или без одноразовых перчаток, масок и т.п. во время операции.
Рекомендация: эксперименты по извлечению РНК лучше всего проводить в отдельных комнатах для манипуляций с РНК, а стол убирается перед экспериментом.
Носите одноразовые перчатки и маски во время эксперимента, чтобы свести к минимуму деградацию РНК, вызванную введением РНКазы.
4. Реагенты загрязнены РНКазой во время использования.
Рекомендация: заменить на новый набор для выделения тотальной РНК животных для связанных экспериментов.
5. Центрифужные пробирки, наконечники и т. д., используемые для манипуляций с РНК, загрязнены РНКазой.
Рекомендация: Убедитесь, что центрифужные пробирки, наконечники, пипетки и т. д., используемые для выделения РНК, не содержат РНКазы.
Очищенная полученная РНК влияет на дальнейшие эксперименты
РНК, очищенная на очистительной колонке, если ионы соли, содержание белка слишком велико, повлияет на последующие эксперименты, такие как: обратная транскрипция, северный блот и др.
1. Элюированная РНК содержит остатки солевых ионов.
Рекомендация: Убедитесь, что в буфер RW2 добавлен правильный объем этанола, и выполните 2 промывки колонок очистки при скорости центрифугирования, указанной для работы;если есть какой-либо остаток солевого иона, оставьте очистительную колонку в буфере RW2 на 5 минут при комнатной температуре и проведите центрифугирование, чтобы максимально удалить солевое загрязнение.
2. Остаток этанола в элюированной РНК.
Рекомендация: Подтвердите, что после промывки буфером RW2 выполните операцию центрифугирования пустой пробирки на скорости центрифугирования, указанной для работы, увеличьте время операции центрифугирования пустой пробирки до 2 минут, если все еще есть остатки этанола, или оставьте ее при комнатной температуре на 5 минут.
