Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Наборы для одноэтапной qRT-PCR с зондом
Описания
В этом продукте используется уникальная буферная система для лизиса, позволяющая быстро высвобождать РНК из культивируемых клеточных образцов для реакций RT-qPCR, исключая трудоемкий и трудоемкий процесс очистки РНК, и всего 7 минут для получения необходимой матрицы РНК с помощью набора 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman, входящего в комплект, который позволяет быстро и эффективно получать количественные результаты ПЦР в реальном времени.
5× Direct RT Mix и 2× Direct qPCR Mix-Taqman обладают высокой устойчивостью к ингибиторам и могут выполнять эффективную обратную и специфическую амплификацию с использованием лизата измеряемого образца в качестве матрицы.Реагент содержит обратную транскриптазу Foregene, ДНК-полимеразу Hot D-Taq, dNTP, MgCl.2, реакционный буфер, оптимизатор ПЦР и стабилизатор, который можно использовать с лизисным буфером для быстрого и простого обнаружения образцов, и который обладает характеристиками высокой чувствительности, специфичности и стабильности.
Технические характеристики
200×20μл Rxns, 1000×20μл Rxns
Компоненты комплекта
QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
Компоненты комплекта 20 мкл реакционной системы для количественной ПЦР | ДРТ-01021 | ДРТ-01022 | Примечание | |
200 т | 1000 т | |||
Часть I | Буфер CL | 4 мл | 20 мл | Лизис клеток |
Фореген Протеаза Плюс II | 80 мкл | 400 мкл | ||
Буфер СТ | 400 мкл | 1 мл × 2 | ||
Часть II | Ластик ДНК | 80 мкл | 400 мкл | |
5 × Прямая RT-микс * | 160 мкл | 800 мкл | RT | |
2× Микс-Taqman для прямой количественной ПЦР * | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 | кПЦР | |
20 × Эталонный краситель ROX | 40 мкл | 200 мкл | ||
ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
Инструкция по эксплуатации | 1 кусок | 1 кусок |
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2×Direct qPCR Mix-Taqman можно приобрести отдельно
Особенности и преимущества
■Просто и эффективно: с технологией Cell Direct RT образцы РНК можно получить всего за 7 минут.
■ Потребность в образцах невелика, можно протестировать всего 10 ячеек.
■ Высокая производительность: он может быстро обнаруживать РНК в клетках, культивируемых в 384-, 96-, 24-, 12- и 6-луночных планшетах.
■ DNA Eraser может быстро удалить высвободившиеся геномы, что значительно снизит влияние на результаты последующих экспериментов.
■ Оптимизированная система RT и qPCR делает двухэтапную обратную транскрипцию RT-PCR более эффективной, а PCR более специфичной и более устойчивой к ингибиторам реакции RT-qPCR.
Применение комплекта
Область применения: культивируемые клетки.
- РНК, высвобождаемая при лизисе образца: применимо только к шаблону RT-qPCR этого набора.
- Набор можно использовать для следующих целей: анализ экспрессии генов, проверка эффекта сайленсинга генов, опосредованного siRNA, скрининг лекарств и т. д.
Хранение и срок годности
Часть I этого комплекта должна храниться в 4℃;Часть II следует хранить при температуре -20 ℃.
Foregene Protease Plus II следует хранить при температуре 4℃, не замерзать при -20 ℃.
Реагент 2×Прямая ПЦР Mix-Taqman должна храниться при -20℃во тьме;при частом использовании его также можно хранить на 4℃ для кратковременного хранения (израсходовать в течение 10 дней).
Принципы разработки праймеров для ПЦР в реальном времени
Прямой праймер и обратный праймер
Для ПЦР в реальном времени очень важен дизайн праймера.Праймеры связаны со специфичностью и эффективностью ПЦР-амплификации и могут быть разработаны с учетом следующих принципов:
- Длина праймера: 18-30 п.н.
- Содержание GC: 40-60%.
- Значение Tm: Программное обеспечение для проектирования праймеров, такое как Primer 5, может указать значение Tm праймера.Значения Tm восходящего и нисходящего праймеров должны быть как можно ближе.Также можно использовать формулу расчета Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).При проведении ПЦР в качестве температуры отжига обычно выбирается температура ниже значения Tm праймера, равного 5 °C (соответствующее повышение температуры отжига может повысить специфичность реакции ПЦР).
- Праймеры и продукты ПЦР:
- Длина продукта ПЦР-амплификации праймеров дизайна предпочтительно составляет 100-150 п.н.
- По возможности следует избегать применения грунтовок для дизайна во вторичной структурной области шаблона.
- Избегайте образования 2 или более комплементарных оснований между 3'-концами вышестоящего и нижестоящего праймеров.
- 3'-концевое основание праймера не может содержать 3 дополнительных последовательных G или C.
- Сами праймеры не могут иметь комплементарных структур, иначе будет образовываться шпилечная структура, влияющая на ПЦР-амплификацию.
- ATCG должен быть распределен как можно более равномерно в последовательности праймера, и следует избегать 3'-концевого основания в виде T.
Приложение1: СЭл ДиректОТ-кПЦР Комплект компонентовпакет добавок
1. Раствор для лизиса клеток
Раствор для лизиса клеток | |||
Компоненты комплекта (24-луночная система лизиса/лунка) | ДРТ-01011-А1 | ДРТ-01011-А2 | |
100 т | 500 т | ||
Частья | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
Фореген Протеаза Плюс II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
Буфер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
ЧастьII | Ластик ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
РТ Микс | |
Компоненты комплекта (20 мкл реакционной системы) | ДРТ-01011-В1 |
200 т | |
5 × Прямая RT Микс | 800 мкл |
ddH без РНКазы2O | 1,7 мл × 2 |
смесь для КПЦР | ||
Компоненты комплекта (20 мкл реакционной системы) | ДРТ-01021-C1 | ДРТ-01021-C2 |
200 т | 1000 т | |
2× Микс-Taqman для прямой количественной ПЦР | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
20× Эталонный краситель ROX | 40 мкл | 200 мкл |
ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл |
Инструкции по эксплуатации: