Набор для выделения общей РНК животных Наборы для выделения и очистки общей РНК для тканей и клеток животных
Описание комплекта:
Быстро и эффективно извлекайте тотальную РНК высокой чистоты и высокого качества из различных тканей животных.
Не нужно беспокоиться о деградации РНК.Вся система не содержит РНКаз
Эффективно удаляйте ДНК с помощью колонки для очистки ДНК
Удаление ДНК без добавления ДНКазы
Простота — все операции выполняются при комнатной температуре
Быстрота — операцию можно выполнить за 30 минут.
Безопасность — не используются органические реагенты
Высокая чистота — OD260/280≈1,8-2,1
Комплекты Описание
50 подготовок, 200 подготовок
В этом комплекте используетсяспин-колонка и формуларазработанная нашей компанией, которая может с высокой эффективностью извлекать высокочистую и высококачественную тотальную РНК из различных тканей животных. Она обеспечивает эффективную колонку для очистки ДНК, которая может легко отделять и адсорбировать геномную ДНК из супернатанта и лизата ткани, просто и экономя время;Колонка только для РНК может эффективно связывать РНК и может обрабатываться одновременно с уникальной формулой Большое количество образцов.
Вся система не содержит РНКаз, поэтому выделенная РНК не деградирует;Buffer RW1, Buffer RW2 система промывки буфера, так что полученная РНК не содержит белков, ДНК, ионов и загрязнений органическими соединениями.
Компоненты комплекта
| Набор для выделения тотальной РНК животных | ||
| Компоненты комплекта | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 т | 200 т | |
| Буфер RL1* | 25мл | 100мл |
| Буфер RL2 | 15мл | 60мл |
| Буфер RW1* | 25мл | 100мл |
| Буфер RW2 | 24мл | 96мл |
| ddH2O без РНКазы | 10мл | 40мл |
| Колонка только для РНК | 50 | 200 |
| Колонка для очистки ДНК | 50 | 200 |
| Инструкция по эксплуатации | 1 кусок | 1 кусок |
Информация о продукте
| Формат | Спиновая колонка | Компонент очистки | Колонка Фореген, реагент |
| Флюс | 1-24 образца | Время на подготовку | ~30 мин (24 образца) |
| Центрифуга | Настольная центрифуга | Пиролизное разделение | Центробежная сепарация |
| Образец | Ткань животного происхождения;клетка | Количество образцов | Ткань: 10-20 мг;Ячейка:(1-5)×106 |
| Объем элюции | 50-200 мкл | Максимальный объем загрузки | 850 мкл |
Особенности и преимущества
■ Не нужно беспокоиться о деградации РНК;вся система не содержит РНКаз
■ Эффективное удаление ДНК с помощью колонки для очистки ДНК
■ Удаление ДНК без добавления ДНКазы
■ Простота – все операции выполняются при комнатной температуре
■ Быстрая - операция может быть завершена за 30 минут.
■ Безопасность — органический реагент не требуется
■ Высокая чистота -OD260/280≈1,8-2,1
Применение комплекта
Он подходит для выделения и очистки тотальной РНК из различных свежих или замороженных тканей животных или культивируемых клеток.
Параметры продукта
■ Последующие приложения: синтез кДНК первой цепи, ОТ-ПЦР, молекулярное клонирование, нозерн-блоттинг и т. д.
■ Образцы: ткани животных, культивированные клетки
■ Дозировка: ткани 10-20 мг, клетки (2-5)×106
■ Максимальная емкость ДНК-связывания колонки для очистки: 80 мкг.
■ Объем элюирования: 50–200 мкл.
Диаграмма
Набор для выделения общей РНК животных, обработанный 20 мг
Свежие образцы мыши, возьмите 5% очищенную общую РНК 1% агар
Гликогель электрофорез
1: Селезенка 2: Почки
3: Печень 4: Сердце
Хранение и срок годности
Набор можно хранить в течение 24 месяцев при комнатной температуре (15–25 ℃) или 2–8 ℃ в течение более длительного времени.Буфер RL1 можно хранить при 4 ℃ в течение 1 месяца после добавления β-меркаптоэтанола (необязательно).
Цитируемые статьи
1.ЕСЛИ: 18.808:Чжэн, К., Цинь, Ф., Луо, Р., и др.Нагруженные мРНК липидоподобные наночастицы для редактирования основания печени посредством оптимизации дизайна центрального композита.Доп.Функц.Матер.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.ЕСЛИ: 18.187:He X, Hong W, Yang J и др.Спонтанный апоптоз клеток в терапевтических препаратах стволовых клеток оказывает иммуномодулирующее действие за счет высвобождения фосфатидилсерина.Сигнальный преобразователь Target Ther.2021 14 июля; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.ЕСЛИ: 17,97: Дай Зи, Лю Х, Ляо Дж и др.Модификация тРНК N7-метилгуанозина усиливает трансляцию онкогенной мРНК и способствует прогрессированию внутрипеченочной холангиокарциномы.Мол Ячейка.2021 29 июля: S1097-2765 (21) 00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.ЕСЛИ: 9,225: Цао X, Шу Ю, Чен Ю и др.Mettl14-опосредованная модификация m6A способствует регенерации печени путем поддержания гомеостаза эндоплазматического ретикулума.Селл Мол Гастроэнтерол Гепатол.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
наборы для выделения РНК другие источники образцовдоступны:
Клеточные, растительные, вирусные, кровяные и др.
РНК не экстрагируется или выход РНК низкий
Часто существует множество факторов, влияющих на эффективность извлечения, например: содержание РНК в образце ткани, метод операции, объем элюции и т. д.
1. Во время работы проводили ледяную баню или криогенное (4 °C) центрифугирование.
Рекомендация: Работать при комнатной температуре (15-25°С) на протяжении всего процесса, не использовать ледяную баню и центрифугировать при низких температурах.
2. Неправильное хранение проб или чрезмерное время хранения проб.
Рекомендация: Храните образцы при температуре -80 °C или замораживайте в жидком азоте и избегайте многократного замораживания-оттаивания;попробуйте использовать свежие ткани или культивированные клетки для выделения РНК.
3. Недостаточный лизис образца.
Рекомендация: при гомогенизации ткани убедитесь, что ткань достаточно гомогенизирована, а клетки ткани достаточно расщеплены, чтобы объяснить высвобождение РНК.
4. Неправильно добавлен элюент.
Рекомендация: Подтвердите, что ddH не содержит РНКазы.2О добавляют по каплям в середину мембраны очистительной колонны.
5. В буфер RL2 или буфер RW2 был добавлен неправильный объем абсолютного этанола.
Рекомендация: Следуйте инструкциям, добавьте правильный объем абсолютного этанола в буфер RL2 и буфер RW2 и хорошо перемешайте перед использованием набора.
6. Неправильная дозировка образца ткани.
Рекомендация: используйте 10–20 мг ткани или (1–5) × 106клеток на 500 мкл буфера RL1, так как чрезмерное использование тканей может привести к снижению выделения РНК.
7. Неправильный объем элюции или неполная элюция.
Рекомендация: объем элюции очистительной колонки 50-200 мкл;если эффект элюирования неудовлетворителен, рекомендуется увеличить время помещения при комнатной температуре после добавления предварительно нагретой ddH без РНКазы.2О, например, в течение 5-10 мин.
8. После промывки буфером RW2 в очистной колонке остается этанол.
Рекомендация: при наличии остатка этанола после промывки буфером RW2, центрифугирование пустой пробирки в течение 1 мин, время операции центрифугирования пустой пробирки можно увеличить до 2 мин, или колонку для очистки можно поместить при комнатной температуре на 5 мин для адекватного удаления остаточного этанола.
Очищенная РНК деградирует
Качество очищенной РНК зависит от таких факторов, как сохранность образца, загрязнение РНКазой, манипуляции и т. д.
1. Образцы тканей не хранятся вовремя.
Рекомендация: Если образцы ткани или клетки не используются своевременно после сбора, немедленно заморозьте их при температуре -80 °C или в жидком азоте.Для выделения РНК по возможности используйте только что взятый образец ткани или клетки.
2. Повторное замораживание-оттаивание образцов тканей.
Рекомендация: при хранении образцов тканей лучше всего разрезать их на мелкие кусочки для сохранения и удалять один из кусочков при использовании, чтобы избежать повторного замораживания-оттаивания образца и деградации РНК.
3. РНКаза введена или без одноразовых перчаток, масок и т.п. во время операции.
Рекомендация: эксперименты по извлечению РНК лучше всего проводить в отдельных комнатах для манипуляций с РНК, а стол убирается перед экспериментом.
Носите одноразовые перчатки и маски во время эксперимента, чтобы свести к минимуму деградацию РНК, вызванную введением РНКазы.
4. Реагенты загрязнены РНКазой во время использования.
Рекомендация: заменить на новый набор для выделения тотальной РНК животных для связанных экспериментов.
5. Центрифужные пробирки, наконечники и т. д., используемые для манипуляций с РНК, загрязнены РНКазой.
Рекомендация: Убедитесь, что центрифужные пробирки, наконечники, пипетки и т. д., используемые для выделения РНК, не содержат РНКазы.
Очищенная полученная РНК влияет на дальнейшие эксперименты
РНК, очищенная на очистительной колонке, если ионы соли, содержание белка слишком велико, повлияет на последующие эксперименты, такие как: обратная транскрипция, северный блот и др.
1. Элюированная РНК содержит остатки солевых ионов.
Рекомендация: Убедитесь, что в буфер RW2 добавлен правильный объем этанола, и выполните 2 промывки колонок очистки при скорости центрифугирования, указанной для работы;если есть какой-либо остаток солевого иона, оставьте очистительную колонку в буфере RW2 на 5 минут при комнатной температуре и проведите центрифугирование, чтобы максимально удалить солевое загрязнение.
2. Остаток этанола в элюированной РНК.
Рекомендация: Подтвердите, что после промывки буфером RW2 выполните операцию центрифугирования пустой пробирки на скорости центрифугирования, указанной для операции, увеличьте время операции центрифугирования пустой пробирки до 2 минут, если все еще есть остаток этанола, или оставьте ее при комнатной температуре на 5 минут после центрифугирования пустой пробирки, чтобы максимально удалить остаток этанола.
