(96-луночный) Набор QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – Taqman
Описания
(96-луночный) QuickEasyTM Набор Cell Direct RT-qPCR–Такманобеспечиваетуникальная буферная система для лизисаto быстро высвобождать РНКиз культивируемой клеткиобразцы для реакций RT-qPCR, исключая трудоемкие и трудоемкиепроцесс очистки РНК, и для получения необходимой матрицы РНК требуется всего 7 минут.5 × Прямая RT Микси2 × Прямая кПЦР Mix-SYBRпредоставленный в коробке может быстро иэффективно получать количественныеРезультаты ПЦР.
5× Direct RT Mix и 2× Direct qPCR Mix-Taqman обладают высокой устойчивостью к ингибиторам и могут использовать лизат тестируемого образца в качестве матрицы для эффективной обратной транскрипции и специфической амплификации.Реагент содержит уникальную обратную транскриптазу Foregene с высоким сродством к РНК, а также ДНК-полимеразу Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2 , реакционный буфер, оптимизатор ПЦР и стабилизатор, и может использоваться в сочетании с лизисным буфером для быстрого, простого и точного обнаружения образца, и он обладает характеристиками высокой чувствительности, высокой специфичности и хорошей стабильности.
Набор предназначен для микросистемного лизиса 96-луночных культивируемых клеток и обладает хорошей однородностью и консистенцией;Компоненты набора обеспечивают 96 реакций лизиса, 96 реакций обратной транскрипции и 96 × 2 реакций qPCR, которые могут соответствовать 96-луночному планшету для одноразового использования, избегая загрязнения, вызванного повторным открытием, замораживанием и оттаиванием реагентов и ухудшением характеристик реагента.
Компоненты комплекта
| Состав комплекта ( 50 μL система лизиса/20 мклRT реакционная система /20μL qPCR реакционная система) | ДРТ-03021 | Примечание | |
| 96Т | |||
| ЧастьI | БуферCL | 5 мл | КлеткаЛизис |
| ФорегенеПротеаза Плюс II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| Часть II | ДНКЛастик | 100 μL | |
| 5 × Прямая RT Микс | 400 μL | RT | |
| 2 × Прямая смесь для количественной ПЦР-Такман | 1 мL × 2 | кПЦР | |
| 50× Эталонный краситель ROX | 400мкл | ||
| РНКаза- Бесплатноддх2 O | 1,7 мл |
| |
| Mанальный | 1 кусок | 1 порция | |
*: Реагент для лизиса DNA Eraser входит в часть II набора;Компоненты Cell Lysis, RT и qPCR можно приобрести отдельно.
Особенности и преимущества
■Просто и эффективно: с технологией Cell Direct RT образцы РНК можно получить всего за 7 минут.
■ Потребность в образцах невелика, можно протестировать всего 10 ячеек.
■ Высокая производительность: он может быстро обнаруживать РНК в клетках, культивируемых в 384-, 96-, 24-, 12- и 6-луночных планшетах.
■ DNA Eraser может быстро удалить высвободившиеся геномы, что значительно снизит влияние на результаты последующих экспериментов.
■ Оптимизированная система RT и qPCR делает двухэтапную обратную транскрипцию RT-PCR более эффективной, а PCR более специфичной и более устойчивой к ингибиторам реакции RT-qPCR.
Применение комплекта
Область применения: культивируемые клетки.
- РНК, высвобождаемая при лизисе образца: применимо только к шаблону RT-qPCR этого набора.
- Набор можно использовать для следующих целей: анализ экспрессии генов, проверка эффекта сайленсинга генов, опосредованного siRNA, скрининг лекарств и т. д.
Хранение и срок годности
Часть I этого комплекта должна храниться в 4℃;Часть II следует хранить при температуре -20 ℃.
Foregene Protease Plus II следует хранить при температуре 4℃, не замерзать при -20 ℃.
Реагент 2×Прямая ПЦР Mix-Taqman должна храниться при -20℃во тьме;при частом использовании его также можно хранить на 4℃ для кратковременного хранения (израсходовать в течение 10 дней).
Принципы разработки праймеров для ПЦР в реальном времени
Прямой праймер и обратный праймер
Для ПЦР в реальном времени очень важен дизайн праймера.Праймеры связаны со специфичностью и эффективностью ПЦР-амплификации и могут быть разработаны с учетом следующих принципов:
- Длина праймера: 18-30 п.н.
- Содержание GC: 40-60%.
- Значение Tm: Программное обеспечение для проектирования праймеров, такое как Primer 5, может указать значение Tm праймера.Значения Tm восходящего и нисходящего праймеров должны быть как можно ближе.Также можно использовать формулу расчета Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).При проведении ПЦР в качестве температуры отжига обычно выбирается температура ниже значения Tm праймера, равного 5 °C (соответствующее повышение температуры отжига может повысить специфичность реакции ПЦР).
- Праймеры и продукты ПЦР:
- Длина продукта ПЦР-амплификации праймеров дизайна предпочтительно составляет 100-150 п.н.
- По возможности следует избегать применения грунтовок для дизайна во вторичной структурной области шаблона.
- Избегайте образования 2 или более комплементарных оснований между 3'-концами вышестоящего и нижестоящего праймеров.
- 3'-концевое основание праймера не может содержать 3 дополнительных последовательных G или C.
- Сами праймеры не могут иметь комплементарных структур, иначе будет образовываться шпилечная структура, влияющая на ПЦР-амплификацию.
- ATCG должен быть распределен как можно более равномерно в последовательности праймера, и следует избегать 3'-концевого основания в виде T.
Приложение1: СЭл ДиректОТ-кПЦР Комплект компонентовпакет добавок
1. Раствор для лизиса клеток
| Раствор для лизиса клеток | |||
| Компоненты комплекта (24-луночная система лизиса/лунка) | ДРТ-01011-А1 | ДРТ-01011-А2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| Частья | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Фореген Протеаза Плюс II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ЧастьII | Ластик ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| РТ Микс | |
| Компоненты комплекта (20 мкл реакционной системы) | ДРТ-01011-В1 |
| 200 т | |
| 5 × Прямая RT Микс | 800 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл × 2 |
| смесь для КПЦР | ||
| Компоненты комплекта (20 мкл реакционной системы) | ДРТ-01021-C1 | ДРТ-01021-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Микс-Taqman для прямой количественной ПЦР | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× Эталонный краситель ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл |
Инструкции по эксплуатации:
