Нет сигналов усиления

1. ДНК-полимераза Taq в наборе теряет свою активность из-за неправильного хранения или истечения срока годности набора.
Рекомендация: Подтвердите условия хранения набора;повторно добавьте соответствующее количество ДНК-полимеразы Taq в систему ПЦР или приобретите новый набор для ПЦР в реальном времени для связанных экспериментов.

2. В матрице ДНК много ингибиторов ДНК-полимеразы Taq.
Предложение: повторно очистить шаблон или уменьшить количество используемых шаблонов.

3. Концентрация Mg2+ не подходит.
Рекомендация: Концентрация Mg2+ в смеси 2× Real PCR, которую мы предоставляем, составляет 3,5 мМ.Однако для некоторых специальных праймеров и матриц концентрация Mg2+ может быть выше.Таким образом, вы можете напрямую добавить MgCl2 для оптимизации концентрации Mg2+.Рекомендуется каждый раз увеличивать Mg2+ на 0,5 мМ для оптимизации.

4. Условия ПЦР-амплификации не подходят, а последовательность или концентрация праймера неверны.
Предложение: подтвердить правильность последовательности праймера и убедиться, что праймер не деградировал;если сигнал амплификации плохой, попробуйте снизить температуру отжига и соответствующим образом отрегулировать концентрацию праймера.

5. Количество шаблона слишком мало или слишком много.
Рекомендация: Выполните разбавление градиента линеаризации шаблона и выберите концентрацию шаблона с лучшим эффектом ПЦР для эксперимента ПЦР в реальном времени.

NTC имеет слишком высокое значение флуоресценции

1. Загрязнение реагентом во время работы.
Рекомендация: заменить новыми реагентами для экспериментов ПЦР в реальном времени.

2. Загрязнение произошло во время подготовки реакционной системы ПЦР.
Рекомендация: Примите необходимые меры защиты во время работы, такие как: ношение латексных перчаток, использование наконечника пипетки с фильтром и т.д.

3. Праймеры разлагаются, и разложение праймеров вызывает неспецифическую амплификацию.
Предложение: используйте электрофорез SDS-PAGE, чтобы определить, деградировали ли праймеры, и замените их новыми праймерами для экспериментов ПЦР в реальном времени.

Димер праймеров или неспецифическая амплификация

1. Концентрация Mg2+ не подходит.
Рекомендация: Концентрация Mg2+ в смеси 2× Real PCR EasyTM, которую мы предоставляем, составляет 3,5 мМ.Однако для некоторых специальных праймеров и матриц концентрация Mg2+ может быть выше.Таким образом, вы можете напрямую добавить MgCl2 для оптимизации концентрации Mg2+.Рекомендуется каждый раз увеличивать Mg2+ на 0,5 мМ для оптимизации.

2. Температура отжига ПЦР слишком низкая.
Предложение: каждый раз повышайте температуру отжига ПЦР на 1 или 2 ℃.

3. Продукт ПЦР слишком длинный.
Рекомендация: Длина продукта ПЦР в реальном времени должна составлять от 100 до 150 п.н., но не более 500 п.н.

4. Праймеры деградируют, а деградация праймеров приведет к появлению специфической амплификации.
Предложение: используйте электрофорез SDS-PAGE, чтобы определить, деградировали ли праймеры, и замените их новыми праймерами для экспериментов ПЦР в реальном времени.

5. Система ПЦР не подходит или слишком мала.
Предложение: Реакционная система ПЦР слишком мала, что приведет к снижению точности обнаружения.Лучше всего использовать реакционную систему, рекомендованную прибором количественной ПЦР, для повторного проведения эксперимента ПЦР в реальном времени.

Плохая повторяемость количественных значений

1. Прибор неисправен.
Предложение: могут быть ошибки между каждым отверстием ПЦР прибора, что приводит к плохой воспроизводимости во время управления температурой или обнаружения.Пожалуйста, проверьте в соответствии с инструкциями соответствующего инструмента.

2. Чистота образца не очень хорошая.
Рекомендация: Загрязненные образцы приведут к плохой воспроизводимости эксперимента, включая чистоту матрицы и праймеров.Лучше всего повторно очистить шаблон, а праймеры лучше всего очистить с помощью SDS-PAGE.

3. Время подготовки и хранения системы ПЦР слишком велико.
Предложение: Используйте систему ПЦР в реальном времени для эксперимента ПЦР сразу после подготовки и не оставляйте ее в стороне слишком долго.

4. Условия ПЦР-амплификации не подходят, а последовательность или концентрация праймера неверны.
Предложение: подтвердить правильность последовательности праймера и убедиться, что праймер не деградировал;если сигнал амплификации плохой, попробуйте снизить температуру отжига и соответствующим образом отрегулировать концентрацию праймера.

5. Система ПЦР не подходит или слишком мала.
Предложение: Реакционная система ПЦР слишком мала, что приведет к снижению точности обнаружения.Лучше всего использовать реакционную систему, рекомендованную прибором количественной ПЦР, для повторного проведения эксперимента ПЦР в реальном времени.