Прямая RT-qPCR Kit III
Описание комплекта:
◮Набор Direct RT-qPCR, использующий обратную транскриптазу Foreasy и ДНК-полимеразу Foreasy HS Taq, разработанные Foregene, с уникальным реакционным буфером, делает этот набор очень устойчивым и совместимым, и он может напрямую тестировать реакцию, используя систему Foregene Lysis в качестве матрицы.Этот набор может применяться для разработки набора для обнаружения нуклеиновой кислоты COVID-19 и набора для обнаружения нуклеиновой кислоты других патогенных бактерий.
Описание
Набор Direct RT-qPCR содержит отдельно упакованный буфер для RT-qPCR (со смешанной ДНК-полимеразой Foreasy HS Taq) и высокоэффективныйForeasy обратная транскриптаза (MMLV),что делает его удобным для создания внутренних комплектов и настройки системы в рамках простой проверки.
Набор Direct RT-qPCR, использующий обратную транскриптазу Foreasy и ДНК-полимеразу Foreasy HS Taq, разработанные Foregene, с уникальным реакционным буфером, делает этот набор очень устойчивым и совместимым, и он может напрямую тестировать реакцию, используя систему Foregene Lysis в качестве матрицы.Этот набор может применяться для разработки набора для обнаружения нуклеиновой кислоты COVID-19 и набора для обнаружения нуклеиновой кислоты других патогенных бактерий.
Этот набор может быть непосредственно компонентом продукта IVD, используя легко и быстро.Нужна только легкая проверка, без повторной разработки.
Технические характеристики
500 т, 50 000 т
Компоненты комплекта
| Комплектация (реакционная система 20 мкл) | ИМ-05111-03 | ИМ-05112-03 |
| 500 т | 50 000 т | |
| Форизи Робратная транскриптаза(200 ЕД/μL) | 50 мкл×1 | 1 мл×5 |
| 2× Прямая ПЦРМикс-Такман | 1 мл × 5 | 500 мл×1 |
| Инструкция | 1 | 1 |
Операционные шаги
A: Подготовка шаблона и реагента
1. Подготовьте подготовленную РНК-матрицу (рекомендуется использовать набор серии Foregene Total RNA Isolation Kit для извлечения и очистки матрицы РНК) или продукт для крекинга образцов (рекомендуется использовать систему Foregene Lysis), специальные праймеры (10 мкМ) и другие соответствующие расходные материалы, инструмент.
2. Поместите 2 × буфера для прямой RT-qPCR, ddH2O без РНКазы и 20 × эталонного красителя ROX (если это необходимо) в коробку со льдом, чтобы они растаяли естественным образом, и аккуратно перемешайте.
B: Подготовка системы RT-qPCR
Получите половину объема реакционного буфера реакционной системы (например, если объем системы составляет 20 мкл, необходимо получить 10 мкл 2 × буфера для прямой ОТ-КПЦР).). Длясоответствующее количество фермента, мы предлагаем этоM-MLV：реакционная система 10-30 U/20 мкл,ТакДНК-полимераза：1-2 ед/20 мкл реакционной системыэто наше предложение, вы должны проверить и настроить его), добавьте матрицу РНК, специфические праймеры и зонды и добавьте ddH без РНКазы.2О до 20 мкл.Конкретная подготовка реакционной системы RT-qPCR может быть указана в следующей таблице 1.
Таблица 1: Подготовка системы RT-qPCR
| Компонент | Объем | Конечная концентрация |
| 2 × буфер для прямой RT-qPCR | 10 мкл | 1× |
| Foreasy обратная транскриптаза (MMLV) | 10-30 У | |
| ДНК-полимераза Foreasy HS Taq | 1-2 У | |
| Передовой праймер (10 мкМ) | 0,8 мкл | 50-900 нМ |
| Обратный праймер (10 мкМ) | 0,8 мкл | 50-900 нМ |
| Зонд (4 мкМ) | 1 мкл | 200 нм |
| Матрица (РНК или лизат) | Х мкл | |
| 20× Эталонный краситель ROX | - | 1* |
| РНКаза-FreeddH2O | (6,4-Х) мкл | |
| Общий объем | 20 мкл |
Примечание. Прямой праймер и обратный праймер являются специфическими праймерами целевого гена.Система количественной ПЦР может быть адаптирована в соответствии с практическими экспериментальными моделями и моделями ПЦР.Мы рекомендуем 400 нМ для конечной концентрации большинства праймеров.Отрегулируйте объем конкретных праймеров и зондов в соответствии с приготовленной концентрацией и рекомендуемой конечной концентрацией.
1*: Выберите подходящую конечную концентрацию эталонного красителя ROX в соответствии с различными инструментами для количественной ПЦР.Оптимальная концентрация эталонного красителя ROX для обычных инструментов для количественной ПЦР показана в следующей таблице:
| Инструменты для количественной ПЦР | Конечная концентрация эталонного красителя ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Шаг первый,и т. д. | 1× (например, добавить 1 мкл эталонного красителя 20×ROX в 20 мкл реакционной системы) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P и Mx4000 и т. д. | 0,5× (например, добавить 0,5 мкл 20× эталонного красителя ROX в 20 мкл реакционной системы) |
| Прибор для ПЦР Roche, прибор для ПЦР Bio-Rad, прибор для количественной ПЦР Eppendorf и т. д. | Без эталонного красителя ROX |
Хранение и срок годности
Набор следует хранить при температуре -20 ± 5 ℃.Его следует немедленно хранить в холодильнике с термостатом -20 ℃.Срок действия 2 года при условии хранения в надлежащем состоянии.
