ДНК-полимераза Foreasy HS Taq
Описание
ДНК-полимераза Foreasy HS Taq представляет собой новый фермент Taq, экспрессируемый в инженерных бактериях Escherichia coli с помощью технологии рекомбинации генов.После обработки фермента специальным процессом, он'Активность s ингибируется перед термической активацией, тем самым ингибируя неспецифическую амплификацию, вызванную неспецифическим отжигом праймеров или димеров праймеров в условиях низкой температуры.Этот продукт подходит для высокоспецифичной ПЦР React.ион, Многократная ПЦР , высокое содержание GC (> 60%),свторичная структураили другойсильный фоновый геномиксАмплификация и крупномасштабный геномиксобнаружение усиления.Фермент обладает 5'→3' ДНК-полимеразной активностью и 5'→3'-экзонуклеазной активностью, но не 3'→5'-экзонуклеазной активностью.
Компоненты комплекта
Компонент | ИМ-01021 | ИМ-01022 | ИМ-01023 |
ДНК-полимераза Foreasy HS Taq (5 ЕД/мкл) | 5000 ЕД (1 мл) | 50 КУ (10 мл) | 500 КУ (100 мл) |
2 × реакционный буфер Taq | 25мл ×5 | 250 мл × 5 | 500 мл × 25 |
Особенности и преимущества
- Высокая специфичность: фермент с высокой активностью горячего старта.
- Быстрое усиление: 10 сек/кб.
- Высокая адаптивность шаблона: может использоваться для эффективного усиления HighGCценитьиразличные трудно амплифицируемые матрицы ДНК.
- Сильная верность: верность в 6 разof обычный фермент Taq.
Применение комплекта
- Различные системы ПЦР/КПЦР и системы прямой ПЦР
- ПЦР-амплифицированный фрагмент ДНК
- метка ДНК
- Секвенирование ДНК
- ПЦР плюс хвост
Определение деятельности
1U: Количество фермента, необходимое для включения 10 нмольДНКв нерастворимое в кислоте вещество с использованием активированной ДНК спермы лосося в качестве матрицы/праймера, 74 °C, 30 минут.
Условия реакции
Температура | Время реакции | Время цикла |
37°С | 5 мин | 1 |
94°С | 5 мин | 1 |
94°С | 10 секунд | 40 |
60°С | 10 секунд |
Примечание:Для систем на 10 мкл и 20 мкл добавьте равный объем минерального масла, если термоциклер не имеет нагревательной крышки.
Условия реакции ПЦР варьируются в зависимости от структурных условий матриц, праймеров и т.п.В конкретной операции необходимо разработать оптимальные условия реакции, включая температуру отжига, время удлинения и т. д., в соответствии с конкретными условиями, такими как тип матрицы, размер целевого фрагмента, последовательность оснований амплифицированного фрагмента, а также содержание GC и длина праймера.
Хранилище
-20 ± 5 °С в течение 2 лет или при -80 °С при длительном хранении.
Нет сигналов усиления
1. ДНК-полимераза Taq в наборе теряет свою активность из-за неправильного хранения или истечения срока годности набора.
Рекомендация: Подтвердите условия хранения набора;повторно добавьте соответствующее количество ДНК-полимеразы Taq в систему ПЦР или приобретите новый набор для ПЦР в реальном времени для связанных экспериментов.
2. В матрице ДНК много ингибиторов ДНК-полимеразы Taq.
Предложение: повторно очистить шаблон или уменьшить количество используемых шаблонов.
3. Концентрация Mg2+ не подходит.
Рекомендация: Концентрация Mg2+ в смеси 2× Real PCR, которую мы предоставляем, составляет 3,5 мМ.Однако для некоторых специальных праймеров и матриц концентрация Mg2+ может быть выше.Таким образом, вы можете напрямую добавить MgCl2 для оптимизации концентрации Mg2+.Рекомендуется каждый раз увеличивать Mg2+ на 0,5 мМ для оптимизации.
4. Условия ПЦР-амплификации не подходят, а последовательность или концентрация праймера неверны.
Предложение: подтвердить правильность последовательности праймера и убедиться, что праймер не деградировал;если сигнал амплификации плохой, попробуйте снизить температуру отжига и соответствующим образом отрегулировать концентрацию праймера.
5. Количество шаблона слишком мало или слишком много.
Рекомендация: Выполните разбавление градиента линеаризации шаблона и выберите концентрацию шаблона с лучшим эффектом ПЦР для эксперимента ПЦР в реальном времени.
NTC имеет слишком высокое значение флуоресценции
1. Загрязнение реагентом во время работы.
Рекомендация: заменить новыми реагентами для экспериментов ПЦР в реальном времени.
2. Загрязнение произошло во время подготовки реакционной системы ПЦР.
Рекомендация: Примите необходимые меры защиты во время работы, такие как: ношение латексных перчаток, использование наконечника пипетки с фильтром и т.д.
3. Праймеры разлагаются, и разложение праймеров вызывает неспецифическую амплификацию.
Предложение: используйте электрофорез SDS-PAGE, чтобы определить, деградировали ли праймеры, и замените их новыми праймерами для экспериментов ПЦР в реальном времени.
Димер праймеров или неспецифическая амплификация
1. Концентрация Mg2+ не подходит.
Рекомендация: Концентрация Mg2+ в смеси 2× Real PCR EasyTM, которую мы предоставляем, составляет 3,5 мМ.Однако для некоторых специальных праймеров и матриц концентрация Mg2+ может быть выше.Таким образом, вы можете напрямую добавить MgCl2 для оптимизации концентрации Mg2+.Рекомендуется каждый раз увеличивать Mg2+ на 0,5 мМ для оптимизации.
2. Температура отжига ПЦР слишком низкая.
Предложение: каждый раз повышайте температуру отжига ПЦР на 1 или 2 ℃.
3. Продукт ПЦР слишком длинный.
Рекомендация: Длина продукта ПЦР в реальном времени должна составлять от 100 до 150 п.н., но не более 500 п.н.
4. Праймеры деградируют, а деградация праймеров приведет к появлению специфической амплификации.
Предложение: используйте электрофорез SDS-PAGE, чтобы определить, деградировали ли праймеры, и замените их новыми праймерами для экспериментов ПЦР в реальном времени.
5. Система ПЦР не подходит или слишком мала.
Предложение: Реакционная система ПЦР слишком мала, что приведет к снижению точности обнаружения.Лучше всего использовать реакционную систему, рекомендованную прибором количественной ПЦР, для повторного проведения эксперимента ПЦР в реальном времени.
Плохая повторяемость количественных значений
1. Прибор неисправен.
Предложение: могут быть ошибки между каждым отверстием ПЦР прибора, что приводит к плохой воспроизводимости во время управления температурой или обнаружения.Пожалуйста, проверьте в соответствии с инструкциями соответствующего инструмента.
2. Чистота образца не очень хорошая.
Рекомендация: Загрязненные образцы приведут к плохой воспроизводимости эксперимента, включая чистоту матрицы и праймеров.Лучше всего повторно очистить шаблон, а праймеры лучше всего очистить с помощью SDS-PAGE.
3. Время подготовки и хранения системы ПЦР слишком велико.
Предложение: Используйте систему ПЦР в реальном времени для эксперимента ПЦР сразу после подготовки и не оставляйте ее в стороне слишком долго.
4. Условия ПЦР-амплификации не подходят, а последовательность или концентрация праймера неверны.
Предложение: подтвердить правильность последовательности праймера и убедиться, что праймер не деградировал;если сигнал амплификации плохой, попробуйте снизить температуру отжига и соответствующим образом отрегулировать концентрацию праймера.
5. Система ПЦР не подходит или слишком мала.
Предложение: Реакционная система ПЦР слишком мала, что приведет к снижению точности обнаружения.Лучше всего использовать реакционную систему, рекомендованную прибором количественной ПЦР, для повторного проведения эксперимента ПЦР в реальном времени.