Низкое отношение A260/A230 обычно вызвано примесями с максимальной длиной волны поглощения 230 нм.Давайте посмотрим, что включают в себя эти примеси:

• Общие загрязнители	Длина волны поглощения	Эффект соотношения
  белок	~ 230 нм и 280 нм	Одновременное уменьшение A260/A 280и А260/A 280отношения
  Гуанидиновая соль	220-240 нм	Уменьшить А260/A 280соотношение
  Фенол	~ 270 нм	-
  Тризол	~ 230нм и 270нм	Уменьшить А260/A 280соотношение
  ЭДТА	~ 230 нм	Уменьшить А260/A 280соотношение
  Спирт этиловый	230-240 нм	Уменьшить А260/A 280соотношение

 
 
 
Длина волны поглощения и контрастное значение распространенных загрязняющих веществ

Pзаражение белками
Белковое загрязнение можно рассматривать как наиболее распространенное загрязнение в процессе экстракции нуклеиновых кислот.Белок находится между верхней водной фазой и нижнейорганическийфаза .Загрязнение снизит соотношение A260/A280 и A260/A230 одновременно, и соотношение A260/A230 изменится более явно, чем соотношение A260/A280.
Во время последующихобратная транскрипцияor КПЦР-реакции, остатки белка могут ингибировать или нарушать функцию фермента.Лучший способ избежать белкового загрязнения — помнить о принципе «скорее меньше, чем больше, небольшое количество много раз» при аспирации надосадочной жидкости.

2. Гуанидиновое загрязнение
гидрохлорид (GuHCl) и тиоцианат гуанидина (GTC) обладают эффектом денатурации белков, которые могут быстро разрушать клеточные мембраны в процессе экстракции нуклеиновых кислот, вызывая денатурацию и осаждение белков.Длина волны поглощения GuHCl и GTC составляет 220-240 нм, аостаточная соль гуанидиния уменьшит соотношение A260/A230.Хотя остаточная соль гуанидиния уменьшит соотношение,влияние на последующие эксперименты на самом деле незначительно.

3. Загрязнение тризолом
Основным компонентом Тризола является фенол.Основная функция фенола заключается в лизисе клеток и высвобождении белков и веществ нуклеиновых кислот в клетках.Хотя фенол может эффективно денатурировать белки, он не может полностью ингибировать активность РНКазы.Поэтому к тризолу добавляют 8-гидроксихинолин, гуанидинизотиоцианат, β-меркаптоэтанол и др. для ингибирования эндогенной и экзогенной РНКазы.
При извлечении клеточной РНК тризол может быстро лизировать клетки и ингибировать нуклеазу, высвобождаемую из клеток, а остаточный тризол значительно снижает соотношение А260/А230.
Способ обработки: При центрифугировании следует учитывать, что фенол в Тризоле легко растворим в водной фазе при 4° и комнатной температуре.

4. Остаток этанола
Этанол используется в конечном процессе для осаждения ДНК при растворении ионов соли, которые могут быть связаны с ДНК.Длина волны поглощения наибольшейпик поглощенияэтанол также находится при 230-240 нм, чтотакже уменьшит соотношение A260/A230.
Метод предотвращения остатка этанола можно повторить дважды во время окончательного элюирования, продуваявытяжной шкафв течение двух минут, чтобы этанол полностью испарился перед добавлением буфера для элюирования.
Однако следует знать, что это соотношение является лишь оценочным показателем качества РНК.Если вышеупомянутые операции строго регламентированы, отклонение соотношения от стандартного диапазона не окажет большого влияния на дальнейшие эксперименты.
Сопутствующие товары:
Набор для выделения тотальной РНК животных
Набор для выделения общей РНК растений
Набор для выделения общей клеточной РНК
Набор для выделения общей РНК растений Plus