Набор для обнаружения нуклеиновых кислот Escherichia coli O157:H7 (метод ПЦР с флуоресцентным зондом)
Описание комплекта:
Кат.№FP102
Он используется для быстрого обнаружения и скрининга E. coli O157:H7 в пищевых продуктах, кормах, пробах воды и пробах окружающей среды.
Описания
Он используется для быстрого обнаружения и скрининга E. coli O157:H7 в пищевых продуктах, кормах, пробах воды и пробах окружающей среды.
[Принцип тестирования]В соответствии с принципом технологии флуоресцентной ПЦР специальные праймеры и зонды Taqman разработаны для конкретного гена Escherichia coli O157: H7 и обнаруживаются с помощью инструмента флуоресцентной ПЦР, чтобы реализовать обнаружение Escherichia coli O157: H7. Качественное обнаружение ДНК.
Комплектация
Примечание. Канальный зонд ROX не входит в комплект.
| Cпротивники | Спецификация | Qколичество |
| Буфер А | Трубка | 1 |
| Буфер Б | Трубка | 1 |
| Положительный контроль | Трубка | 1 |
| Отрицательный контроль | Трубка | 1 |
Ожидаемое использование
Он используется для быстрое обнаружение и скрининг E. coli O157:H7 в пищевых продуктах, кормах, пробах воды и пробах окружающей среды.
Условия хранения и срок годности
Хранить при температуре -20 ℃ в темноте и избегать многократного замораживания и оттаивания.
Срок действия 12месяцев, а дата производства указана на внешней упаковке.
Инструменты и расходные материалы
Флуоресцентный прибор для количественной ПЦР, пипеточный пистолет и соответствующие наконечники, вортексный шейкер, мини-центрифуга.
Применение
1. Образец обработки
1.1 Тип образца: Этот набор подходит для анализа пищевых продуктов, кормов, воды и других образцов, предположительно зараженных Escherichia coli O157:H7.Мясные продукты глубокой переработки, напитки и другие вещества, содержащие пигменты, необходимо промывать, чтобы не повлиять на сбор флуоресцентного сигнала.
1.2 Обработка проб: см. «GB 4789.10-2016 Национальный стандарт безопасности пищевых продуктов для микробиологического исследования пищевых продуктов на кишечную палочку O157: тест H7» для подготовки проб, накопительной культуры и выделения кишечной палочки O157: H7.
- Nэкстракция нуклеиновой кислоты
Возьмите 20 мл раствора для обогащения в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл, добавьте 200 мкл микробного лизата (требуется дополнительный набор), вортексируйте в течение 30 секунд, ненадолго отцентрифугируйте и отложите в сторону.
Примечания: Извлечение нуклеиновой кислоты из лизата должно быть завершено в течение 10 минут, и его нельзя хранить в течение длительного времени.
3. Амплификация нуклеиновых кислот
3.1 Включите прибор для количественной флуоресцентной ПЦР.
Буфер A и буфер B из набора, тщательно расплавьте их и ненадолго отцентрифугируйте.Добавьте 18 мкл буфера А и 2 мкл буфера В в каждую реакционную пробирку для ПЦР.Затем добавьте по 5 мл отрицательного контроля, выделенной нуклеиновой кислоты и положительного контроля в реакционные пробирки для ПЦР, закройте пробирки и ненадолго отцентрифугируйте.
3.3 Перенесите реакционную пробирку для ПЦР в флуоресцентный ПЦР-аппарат и используйте следующие процедуры для проведения экспериментов по амплификации: выберите 25 мл для реакционной системы, соберите сигналы флуоресценции при 60°C для каждого цикла и выберите FAM в качестве канала обнаружения.
| Шаг | Программа | Количество циклов |
| 1 | 37 ℃ 5 мин. | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3мин | 1 |
| 3 | 95°С 15с | 4 0 |
| 60 ℃ 30 с (собрать флуоресценцию) |
Руководства по анализу проблем
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
РНК не может быть извлечена или выход нуклеиновой кислоты низкий
Обычно на эффективность извлечения влияет множество факторов, таких как: содержание РНК в образце, метод работы, объем элюции и т. д.。
Анализ общих причин：
1. Ледяная баня или низкотемпературное (4°С) центрифугирование в процессе работы.
Предложение: Работа при комнатной температуре (15-25 ° C), никогда не ледяная баня и центрифуга при низкой температуре.
2. Неправильное хранение пробы или хранение пробы слишком долго.
Предложение: Храните образцы при температуре -80 ° C или замораживайте в жидком азоте и избегайте многократного использования при замораживании-оттаивании;попробуйте использовать свежесобранные образцы для выделения РНК.
3. Недостаточный лизис образца
Рекомендация: Убедитесь, что образец и рабочий раствор (линейный акриламид) тщательно перемешаны и инкубированы в течение 10 минут при комнатной температуре (15–25 °C).
4.Элюент был добавлен неправильно
Рекомендация: убедитесь, что ddH2O, не содержащая РНКаз, добавлена в середину мембраны очистительной колонки.
5. Неправильный объем безводного этанола в буфере viRW2.
Предложение: следуйте инструкциям, добавьте правильный объем безводного этанола в буфер viRW2 и хорошо перемешайте их перед использованием набора.
6. Неправильное использование образца.
Рекомендация: 200 мкл образца на 500 мкл буфера viRL.Чрезмерный объем образца приведет к снижению скорости выделения РНК.
7. Неправильный объем элюции или неполная элюция.
Предложение: объем элюента очистительной колонки составляет 30-50 мкл;если эффект элюирования неудовлетворителен, рекомендуется добавить предварительно нагретую ddH, не содержащую РНКазы.2O и увеличьте время пребывания при комнатной температуре, например, 5-10 мин.
8. Колонка для очистки имеет остаток этанола после промывки в буфере viRW2.
Предложение: если этанол все еще остается после промывки в буфере viRW2 и центрифугирования в пустой пробирке в течение 2 минут, колонку для очистки можно оставить при комнатной температуре на 5 минут после центрифугирования в пустой пробирке для полного удаления оставшегося этанола.
Деградация очищенных молекул РНК
Качество очищенной РНК зависит от таких факторов, как хранение образца, загрязнение РНКазой и эксплуатация.
Анализ общих причин：
1. Собранные образцы не были сохранены вовремя.
Предложение: если образец не используется вовремя после сбора, немедленно храните его при температуре -80 ℃ или в жидком азоте.Для выделения молекул РНК по возможности старайтесь использовать свежесобранные образцы.
2. Собранные образцы неоднократно подвергались замораживанию и оттаиванию.
Предложение: Избегайте многократного замораживания и оттаивания (не более одного раза) во время сбора и хранения образцов, иначе выход нуклеиновой кислоты снизится.
3. РНКаза была введена в операционной или не были надеты одноразовые перчатки, маски и т. д.
Предложение: Эксперимент по извлечению молекул РНК лучше всего проводить в отдельной операционной комнате с РНК, а перед экспериментом убирать экспериментальный стол.Носите одноразовые перчатки и маски во время эксперимента, чтобы избежать деградации РНК, вызванной введением РНКазы.
4. Реагент загрязнен РНКазой во время использования.
Предложение: заменить новым набором для выделения вирусной РНК для связанных экспериментов.
5. Загрязнение РНКазой центрифужных пробирок, наконечников пипеток и т. д. Предложение: Убедитесь, что центрифужные пробирки, наконечники пипеток и пипетки не содержат РНКазы.
Очищенные молекулы РНК повлияли на дальнейшие эксперименты
Молекулы РНК, очищенные на очистительной колонке, будут влиять на последующие эксперименты, если в них слишком много ионов соли или белков, например: обратная транскрипция, Нозерн-блот и т. Д.。
1. В элюированных молекулах РНК остаются ионы солей.
Рекомендация: убедитесь, что в буфер viRW2 добавлен правильный объем безводного этанола, и дважды промойте колонку для очистки в соответствии с правильной скоростью центрифугирования, указанной в инструкции по эксплуатации. Если ионы соли все еще остаются, вы можете добавить буфер viRW2 в колонку для очистки и оставить ее при комнатной температуре на 5 минут.Затем проведите центрифугирование, чтобы максимально удалить загрязнение ионами солей.
2. В элюированных молекулах РНК остается этанол.
Предложение: убедившись, что колонки для очистки были промыты буфером viRW2, выполните центрифугирование в пустой пробирке в соответствии со скоростью центрифугирования, указанной в инструкции по эксплуатации.Если этанол все еще остается, его можно оставить на 5 минут при комнатной температуре после центрифугирования в пустой пробирке, чтобы максимально удалить оставшийся этанол.
Инструкции по эксплуатации:
Руководство по эксплуатации набора для выделения вирусной РНК
