Как много ты знаешь

О Нэкстракция нуклеиновой кислоты

Начало и конец очищенной нуклеиновой кислоты

В начале все сложно, очищенная нуклеиновая кислота самая

Начало молекулярных экспериментов для последующих экспериментов

Успех или неудача имеют решающее значение.

Следовые/ультраследовые УФ-спектрофотометры предпочитают многие научные исследователи, поскольку они могут определять концентрацию нуклеиновых кислот, а также остатки белков и ионов солей просто, быстро и экономично.

Как мы все знаем, A260 означает значение OD поглощения нуклеиновой кислоты, A280 означает значение OD поглощения концентрации белка, A230 означает значение OD поглощения концентрации ионов соли, поэтому A260 может преобразовывать концентрацию нуклеиновой кислоты, A260/280 означает остаток белка, A260/230 означает остаток иона соли, но это всего лишь правило, обнаруженное исследователями на основе большого количества результатов измерений, и это ”общепринятый«верить, что это может объяснить чистоту ДНК и РНК дляв определенной степени.Это не единственный стандарт для определения выхода и чистоты нуклеиновых кислот, он используется только в качестве эталона и не является «золотым стандартом».

Руководство Thermo Fisher ND-2000 подчеркивает надежность результатов испытаний.

Причина в том, что результаты, полученные с помощью микро/ультрамикро УФ-спектрофотометра, отражают только выход и чистоту нуклеиновой кислоты со стороны, и существует множество влияющих факторов (оптический путь, объем образца, концентрация образца, значение pH, другие ионы, влияющие на измерение абсорбции и т. д.), измеренное значение ОП не обязательно является точным.В то же время из-за отсутствия специфичности материала для определения значения поглощения одноцепочечная ДНК, двухцепочечная ДНК, РНК, dNTP и некоторые белки имеют пики поглощения при длине волны 260 нм, а концентрация, определяемая только A260, не обязательно является реальной ДНК или РНК.Концентрация, а также ее целостность и деградация не могут быть оценены.

Так как же судить о качестве нашей очищенной нуклеиновой кислоты?В дополнение к использованию микро/ультрамикро УФ-спектрофотометра для обнаружения, такие методы, как электрофорез в агарозном геле, также необходимы для визуального отображения чистоты и целостности нуклеиновой кислоты, а также для указания концентрации в определенной степени.Таким образом, выход и чистота нуклеиновой кислоты, полученные по результатам обнаружения различными методами, заслуживают доверия.

Сравнение экспериментальных диаграмм

Геномная ДНК клеток H1299 была извлечена с использованием наборов для выделения ДНК компании А, и было обнаружено значительное загрязнение примесями, что привело к высоким значениям оптической плотности.

(Значение измерения ОП и соответствующая электрофореграмма)

Индекс оценки

Существует ли «золотой стандарт» для тестирования выхода нуклеиновых кислот и качества?

Насколько нам известно, простого, быстрого и дешевого метода не существует.Будь то спектрофотометрия, гель-электрофорез или масс-спектрометрия, все они отражают концентрацию и чистоту нуклеиновой кислоты в растворе с разных сторон, и о них нужно судить, ссылаясь друг на друга.

Наилучший индекс оценки всегдапоследующее экспериментальное приложение.Не влияет на эффективность обратной транскрипции и ПЦР-амплификации.Получение надежных продуктов амплификации и значений Ct, а также получение полной последовательности путем секвенирования является успешной экстракцией нуклеиновой кислоты.

Подводя итог, можно сказать, что точка зрения теории только отношения должна быть оспорена точкой зрения «использования хороших результатов последующих экспериментов в качестве хороших параметров экстракции»!

Рекомендуемые наборы Foregene для выделения ДНК и РНК для получения высокой чистоты ДНК/РНК:

https://www.foreivd.com/regent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/regent/rna-isolation-series/