Вести

Длинная некодирующая РНК, днРНК представляет собой некодирующую РНК длиной более 200 нуклеотидов, обычно от 200 до 100000 нуклеотидов.днРНК регулирует экспрессию генов на эпигенетическом, транскрипционном и посттранскрипционном уровнях и участвует в молчании Х-хромосомы, импринтинге генома и модификации хроматина, активации транскрипции, интерференции транскрипции, ядерном транспорте, регуляции клеточного цикла, регуляции клеточной дифференцировки и эффекте компенсации дозы (эффект компенсации дозы) и многих других важных процессах регуляции, тесно связанных с возникновением, развитием и предотвращением заболеваний человека, и в настоящее время являются одной из горячих точек в области биомедицины.

01  Типы и характеристики LncRNA

lncRNA подразделяются на множество типов в соответствии с различными источниками ее образования, как показано на рисунке выше.Имеет следующие характеристики:

1. днРНК обычно длиннее, с динамической экспрессией и различными методами сплайсинга во время дифференцировки.
2. По сравнению с кодирующими генами днРНК обычно имеют более низкий уровень экспрессии.
3. Большинство днРНК обладают очевидной временной и пространственной специфичностью экспрессии в процессе тканевой дифференцировки и развития.
4. Имеются характерные проявления при опухолях и других заболеваниях
5. Субклеточное расположение днРНК разнообразно.
6. Последовательность мало сохраняется, но функция имеет определенную степень сохранения и т. д.

02 Часто задаваемые вопросы об обратной транскрипции LncRNA

Из-за низкого содержания днРНК в клетках, большой длины и высокоуровневой структуры такая РНК часто имеет сложные структуры, такие как стержневые петли или шпильки, и ОТ-кПЦР подвержена проблемам неудачной обратной транскрипции или низкой эффективности.

03 Раствор для обратной транскрипции LncRNA

Согласно основному правилу, процесс РНК-вирусов, использующих свою собственную обратную транскриптазу для синтеза ДНК с использованием РНК в качестве матрицы, называется обратной транскрипцией.Процесс использования обратной транскриптазы РНК-вируса для синтеза матрицы кДНК in vitro называется обратной транскрипцией.Основные элементы, входящие в систему обратной транскрипции: РНК-матрица, обратная транскриптаза, праймеры и другие компоненты.

1. Матрица РНК

Влияние матрицы РНК на обратную транскрипцию отражается на ее структуре, чистоте и целостности.Чем выше чистота и целостность выделенной РНК, тем выше эффективность обратной транскрипции и тем точнее последующие количественные результаты.РНК, очищенная с помощью обычно используемых реагентов для выделения РНК, часто содержит остатки спирта и солей гуанидина, которые оказывают сильное ингибирующее действие на большинство обратной транскриптазы.

2. Обратная транскриптаза

Обратная транскриптаза оказывает ключевое влияние на всю систему обратной транскрипции.Подходящая температура для обратной транскриптазы, используемой в большинстве лабораторий, обычно составляет 42°C.На самом деле для раскрытия высокоуровневой структуры РНК требуется более высокая температура, и требования к обратной транскриптазе выше.

3.Грунтовка

Праймеры для обратной транскрипции включают ген-специфические праймеры, случайные праймеры и праймеры Oligo dT.Большинство lncRNAs не содержат полиА-хвосты, и важно правильно сопоставить случайные праймеры с Oligo dT.

4. Другие компоненты

Ввиду того, что РНК особенно легко расщепляется, введение компонентов в систему обратной транскрипции может быть сведено к минимуму, что может эффективно предотвратить проникновение РНКазы и обеспечить плавный ход обратной транскрипции.

Fорегенполучает из матрицы РНК, обратная транскрипция в qPCR

Комплексное сопровождение обнаружения днРНК

Тотальная РНК I животныхотрадаКомплект (с колонкой для удаления гДНК)

Общая клеточная РНК IотрадаКомплект (с колонкой для удаления гДНК)

Lnc-RT HeroTM I (с гДНазой) (суперпремикс для синтеза кДНК первой цепи из днРНК)

ПЦР в реальном времени EasyTM-SYBR Green I

Aпреимущества ofЭкстракция РНК:

В наборе используется технология выделения РНК третьего поколения, нет необходимости использовать ДНКазу.

11 минут из клеток, культивируемых в 96-, 24-, 12- и 6-луночных планшетах, высокоэффективная экстракция не содержащей гДНК, высокочистой, высококачественной тотальной клеточной РНК.

Преимущества обратной транскрипции днРНК:

Система обратной транскрипции, специально разработанная для LncRNA для быстрого удаления загрязнения геномной ДНК.

Система обратной транскрипции обладает высокой термической стабильностью и по-прежнему имеет хорошие характеристики обратной транскрипции при 50°C.

Шаблоны с высоким содержанием GC и сложной вторичной структурой могут быть реверсированы с высокой эффективностью.

Преимуществаof qПЦР:

Горячий старт Foregene Taq Polymerase обладает более высокой эффективностью амплификации, более высокой чувствительностью амплификации и более высокой специфичностью амплификации.

Благодаря оптимизированной смеси Real PCR Easy Mix SYBR Green I имеет более высокую чувствительность обнаружения, а интенсивность его флуоресценции в 3-5 раз выше, чем у аналогичных продуктов, что может удовлетворить потребности различных типов количественных экспериментов по флуоресценции.