Методы ПЦР и аэрозольное загрязнение нуклеиновых кислот в лабораториях по тестированию нуклеиновых кислот — две стороны одной медали.Мы можем только выбирать, иметь их или нет, но мы не можем выбирать, хотим мы их или тратим.

1. Скрининг средства для удаления ДНК

Чтобы достичь пространственного удаления аэрозольных загрязнений нуклеиновыми кислотами, сначала необходимо отсеять средства для удаления ДНК, которые могут удалять нуклеиновые кислоты в жидком состоянии.Потому что не так много средств для удаления ДНК, которые действительно работают.Об экспериментальном методе см.: Средство для удаления ДНК не может быть «потайным уголком» лаборатории!

В этом эксперименте 100 копий/мкл (КТ приблизительно 31) плазмиды вируса АЧС и средства для удаления ДНК, определенного с помощью цифровой ПЦР, смешивали в равных объемах, а затем реагировали при комнатной температуре в течение 10 мин, 20 мин и 30 мин соответственно.После выделения нуклеиновой кислоты проводили амплификацию КПЦР.Сравнивали положительный контроль, смешанный с плазмидой и водой.Поскольку эксперимент не был завершен одновременно, между результатами может быть определенное расхождение, но оно не влияет на заключение эксперимента.На данный момент я оценил 10 коммерческих продуктов для удаления ДНК.Только продукты № 1, № 6 и № 8 могут эффективно разрушать плазмидную ДНК в жидком состоянии.Остальные продукты практически не действуют.

Таблица 1 Эффект удаления нуклеиновой кислоты коммерчески доступным средством для удаления ДНК

2. Эксперимент по эффекту удаления ДНК часто используемых дезинфицирующих средств.

1. Скрининг часто используемых дезинфицирующих средств

В лабораториях обычно используются многие виды дезинфицирующих средств: альдегиды, фенолы, спирты, четвертичные аммониевые соли, пероксиды, препараты хлора, кислоты и основания.Обеззараживающее действие этих дезинфицирующих средств на микроорганизмы полностью проверено экспериментально, однако достаточных экспериментальных данных о деградационном действии нуклеиновых кислот нет.Лаборатории по тестированию нуклеиновых кислот нуждаются в дезинфицирующем средстве, которое не только оказывает хорошее обеззараживающее действие на микроорганизмы, но и способно разрушать ДНК.Результаты испытаний показывают, что только два хлорных препарата из дезинфицирующего средства 84 и трихлоризоциануровой кислоты и 1 М соляной кислоты соответствуют требованиям.Поскольку 1 М соляная кислота обладает высокой коррозионной активностью, рекомендуется использовать препараты хлора для удаления отходов в лабораториях по тестированию нуклеиновых кислот.Однако препараты хлора вызывают коррозию металлов и не могут применяться для дезинфекции инструментов и оборудования.

Таблица 2 Эффекты удаления ДНК различными типами дезинфицирующих средств

2. Минимальная эффективная концентрация хлорсодержащих препаратов

Дезинфицирующие средства на основе хлора обладают сильным эффектом деградации ДНК, но из-за их коррозионной активности и раздражения металлов их можно использовать для мытья пола, неметаллических столешниц, наконечников для замачивания, центрифужных пробирок и других предметов для испытаний.

В соответствии с «Новым техническим руководством по эпидемической дезинфекции коронарной пневмонии»: Загрязняющие вещества (кровь пациентов, выделения и рвотные массы) доступный хлор 5 г/л-10 г/л хлорсодержащее дезинфицирующее средство;полы, стены и поверхности предметов используют дезинфицирующее средство с доступным хлором 1 г/л: одежду, постельное белье и другие текстильные изделия сначала замачивают в дезинфицирующем средстве с содержанием хлора с концентрацией 0,5 г/л доступного хлора на 30 минут, а затем очищают, как обычно.

Таблица 3 Влияние различных концентраций дезинфицирующего средства на основе хлора на удаление ДНК

Результаты испытаний показывают, что: когда эффективная концентрация хлора больше или равна 1,2 г/л, хлорсодержащее дезинфицирующее средство может полностью разложить 100 копий/мкл плазмиды при его использовании в течение 5 минут.Дезинфицирующее средство 84 с эффективной концентрацией хлора не менее 0,6 г/л при воздействии в течение 10 минут может полностью разрушить 100 копий/мкл плазмид.

3. Эксперимент по удалению воздуха, загрязненного аэрозолем нуклеиновой кислоты.

Как очистить воздух от аэрозолей нуклеиновых кислот?Большинство мыслей состоит в том, чтобы создать загрязненную аэрозолем среду и затем очистить ее или очистить от нуклеиновых кислот после загрязнения.Для меня эксперимент, который нельзя повторить и результаты эксперимента нельзя проанализировать количественно, не имеет смысла, поэтому я позаимствовал некоторые методы дезинфицирующего обеззараживания воздуха.См. «Общие требования GB27948-2020 к средствам для дезинфекции воздуха» и «Технические спецификации по дезинфекции».

1. Тестовые материалы

1.1 Средство для удаления ДНК. В этом эксперименте были выбраны два коммерчески доступных устройства для удаления ДНК 6 и 8 в таблице 1.

1.2 Тестовая плазмида: Учитывая, что значение CT большинства лабораторных загрязнений будет выше 30, концентрация плазмиды с геном вируса АЧС, используемой на этот раз, составляет около 100 копий/мкл, а флуоресцентная количественная ПЦР CT составляет около 31,07.Добавьте плазмиду на флокированный ватный тампон и высушите на воздухе.

1.3 Испытательный прибор: прибор для дезинфекции Bilingkehan KVBOX, любезно поддерживаемый Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., обладает превосходными характеристиками дезинфекции воздуха с помощью дезинфицирующего средства перекиси водорода и может эффективно уничтожать споры и другие микроорганизмы.

1.4 Тестовое пространство: закрытое трансферное окно объемом около 0,1 куб.

2. Метод испытаний

Количество дезинфицирующего средства, установленного на машине для дезинфекции, составляет 10 мл, а концентрация составляет 100 мл/м3, что намного выше, чем «Общие требования GB27948-2020 к дезинфицирующим средствам воздуха»: при использовании аэрозольной дезинфекции количество дезинфицирующего средства должно быть ≤10 мл/м3.