Установите СОП эксперимента ПЦР, чтобы стандартизировать поведение персонала эксперимента.
Экспериментатор строго соблюдает рабочие процедуры и минимизирует загрязнение ПЦР, которое может быть вызвано человеческим фактором, или предотвращает возникновение загрязнения.Кроме того, экспериментатор должен обладать соответствующими профессиональными знаниями и навыками, в том числе владеть сопутствующей аппаратурой, разъяснять весь процесс работы, владеть методами очистки от загрязнений и методами лабораторного контроля качества, уметь правильно интерпретировать результаты испытаний.
Создать стандартную ПЦР-лабораторию.
Лаборатория ПЦР принципиально разделена на четыре зоны: зону подготовки реагентов, зону обработки образцов, зону амплификации и зону анализа продуктов амплификации.Первые две области являются областями до усиления, а последние две области — областями после усиления.Зона предварительного усиления и зона постамплификации должны быть строго разделены.Экспериментальные материалы, реагенты, бумага для записей, ручки, чистящие материалы и т. д. могут поступать только из зоны предварительного усиления в зону постамплификации, то есть из зоны подготовки реагентов → зону обработки образца → зону амплификации → зону анализа продукта амплификации, и не должны течь в обратном направлении.Воздушный поток в лаборатории также должен проходить из зоны предварительного усиления в зону постусиления, а не в обратном направлении.Идеальный дизайн лаборатории ПЦР показан ниже:
Рисунок A: Идеальный режим лабораторной установки ПЦР с отрицательным давлением в буферной комнате
Рисунок B: Идеальный режим лабораторной установки ПЦР с положительным давлением в буферной комнате
Схемы лабораторной установки ПЦР, приведенные на рис. A и рис. B, должны быть более идеальным режимом настройки, и лаборатория с условиями может ссылаться на этот режим для проектирования.Для обычных лабораторий рекомендуется, чтобы зона амплификации ПЦР и зона анализа продукта могли быть разделены, а открытие крышки должно быть максимально уменьшено в зоне подготовки проб и зоне амплификации ПЦР.Помните: продукты и экспериментальные материалы, находящиеся в зоне анализа продуктов, строго запрещается проносить в зону подготовки образцов и зону амплификации ПЦР.
Если лаборатория выполняет только ПЦР-детекцию и идентификацию, рекомендуется использовать флуоресцентную количественную ПЦР вместо обычной ПЦР.
Результаты количественного определения флуоресценции ПЦР можно собирать и анализировать по сигналам флуоресценции, поэтому нет необходимости открывать крышку для электрофореза после реакции, что позволяет избежать загрязнения продукта ПЦР, вызванного утечкой продуктов реакции с образованием аэрозолей.Если вы увеличите количество отверстий крышки на этапе загрузки гель-электрофореза, вероятно, произойдет аэрозольное загрязнение.Рекомендуется продвигать применение количественной ПЦР и постепенно заменять качественную ПЦР.
Для реакции ПЦР используется система UNG против загрязнения продуктами ПЦР.
Система использует dUTP вместо dTTP.После реакции ПЦР все продукты ПЦР (фрагменты ДНК) объединяются с dUTP;в следующем раунде реакции ПЦР фермент UNG, добавленный в систему, инкубируют при 37°C в течение 5 минут перед ПЦР, который может специфически расщепить все фрагменты ДНК, содержащие dUTP, а затем проводят реакцию ПЦР.Это может полностью удалить аэрозольное загрязнение, вызванное продуктами ПЦР.Эффект показан на рисунке ниже:
Примечание. Для прямой серии ПЦР вы можете выбрать серию продуктов системы защиты от загрязнения продуктами ПЦР от Foregene.Предлагать
Лабораториям, которые проводят крупномасштабное тестирование генотипа, настоятельно рекомендуется использовать систему загрязнения продуктов UNG против ПЦР для тестирования реагентов в дополнение к строительству разумных лабораторий.
Напоминание: Использование этой системы не может удалить загрязнение продукта ПЦР, которое уже было вызвано.Поэтому систему UNG следует использовать в начале соответствующего теста, а систему UNG следует использовать для амплификации ПЦР, чтобы предотвратить загрязнение продуктов ПЦР. Ложноположительный результат.
Рекомендуется использовать систему Direct PCR-UNG компании Foregene при проведении крупномасштабных испытаний, таких как:
Набор для прямой ПЦР на листьях растений-UNG；
Набор для прямой ПЦР семян растений-UNG；
Набор для прямой ПЦР на ткани животных-UNG；
Набор для прямой ПЦР с хвостом мыши-UNG;
Набор для прямой ПЦР с рыбками зебры-UNG。
Эта серия комплектов от Foregeneможет не только выполнять обнаружение ПЦР быстро и в больших масштабах, но также эффективно предотвращать и контролировать загрязнение продукта ПЦР.
Время публикации: 19 марта 2021 г.
