1: Своевременно заменяйте экспериментальные материалы

Настройте (NTC) отрицательный контроль и повторите его много раз.Как только в лаборатории будет обнаружено загрязнение продуктами ПЦР, своевременно замените все экспериментальные расходные материалы.Например: повторное разбавление и подготовка праймеров, повторная стерилизация наконечника пипетки, пробирки EP, ddH2O и т. д., замена пипетки новой и временное использование других лабораторий для проведения экспериментов ПЦР.Загрязненную лабораторию необходимо проветрить и облучить ультрафиолетовыми лучами до устранения контаминации продуктом ПЦР перед продолжением эксперимента.

2: Продлить время воздействия УФ-излучения

Стоит отметить, что для удаления загрязнения ДНК регулярное ультрафиолетовое облучение должно быть продлено на 2 часа, чем обычно.Несмотря на это, влияние УФ-облучения на удаление небольших фрагментов (ниже 200 п.н.) ДНК-загрязнения все еще недостаточно.

Длина волны ультрафиолета (нм) обычно составляет 254/300 нм, и этого достаточно для облучения в течение 30 минут.Следует отметить, что при выборе УФ для устранения загрязнения остаточными продуктами ПЦР следует учитывать длину продукта ПЦР и распределение оснований в последовательности продуктов.УФ-облучение эффективно только для длинных фрагментов размером более 500 п.н. и мало влияет на короткие фрагменты.

При УФ-облучении пиримидиновые основания в продукте ПЦР образуют димеры.Эти димеры могут прерывать удлинение, но не все пиримидины в цепи ДНК могут образовывать димеры, и УФ-облучение также может разрушить димеры..Степень образования димера зависит от длины волны УФ-излучения, типа пиримидинового димера и последовательности нуклеотидов, примыкающих к участку димера.Поэтому, если амплифицированные фрагменты ПЦР малы, рекомендуется использовать систему UNG против загрязнения продукта ПЦР.

3: Обычно используемые поглотители загрязнения ДНК

При добавлении пипеток легко образуются аэрозоли, которых трудно избежать, и они быстро осядут.Таким образом, это, несомненно, хороший выбор для частого использования специальных поглотителей загрязнения ДНК, чтобы предотвратить распространение загрязнения ДНК.

4: Используйте систему защиты от загрязнения UNG

После удаления загрязнения продукта ПЦР испытательная лаборатория может использовать систему UNG против загрязнения продукта ПЦР, чтобы предотвратить загрязнение продукта ПЦР.В общих лабораториях вы можете выполнять простые экспериментальные перегородки, строго отделять зону продукта ПЦР от других зон, устанавливать определенные лабораторные правила и положения и проводить соответствующее обучение, чтобы предотвратить возникновение загрязнения продукта ПЦР.

Рекомендации: Создание разумной ПЦР-лаборатории, поддержание хорошей среды ПЦР, формулирование стандартных операционных процедур ПЦР и культивирование строгой операционной осведомленности экспериментаторов являются ключами к предотвращению или уменьшению загрязнения экспериментов ПЦР.