W:Брат, обратная транскрипция завершена, и, наконец, последний шаг – флуоресцентная количественная ПЦР!Эй, брат, что такое количественная ПЦР в реальном времени?
М:ПЦР ты всегда знаешь, да?
В: Вы знаете, ПЦР — это полимеразная цепная реакция, и это технология, которая увеличивает ДНК!
М: Это почти… Это технический метод амплификации целевой последовательности более чем в миллион раз с помощью определенных праймеров, но это указывает только на наличие или отсутствие целевой последовательности и не может определить количество исходной матрицы.Количественная флуоресцентная ПЦР представляет собой технический метод, разработанный для решения этой проблемы.Обычно к нему относятся ПЦР в реальном времени и количественная ПЦР (qPCR).
В: Отличие от обычной ПЦР заключается в количественном определении флуоресценции?
М: Да, то есть на стадии расширения каждого цикла ПЦР определяется интенсивность сигнала флуоресценции, и исходное количество матрицы может быть рассчитано в соответствии с изменением интенсивности сигнала.
W: Это кажется таким сложным!Должен ли я рассчитывать это самостоятельно?
М: Это требует от вас медленного обучения, лучше всего уметь понять принцип.Теперь вы можете сначала сосредоточиться на значении CT, которое представляет собой относительно интуитивно понятные экспериментальные данные, а его размер соответствует размеру исходного количества шаблона.Есть также графики, такие как кривые усиления и кривые плавления.За ними остается последнее слово в том, будет ли ваш эксперимент успешным или нет.
В: О, брат.Тогда я собираюсь провести эксперимент с количественной ПЦР!
M: Обратите особое внимание на то, чтобы не добавлять шаблоны в область реагентов, иначе ваша неиспользованная смесь будет легко загрязнена!
У: Понял!

1

ПЦР в реальном времени Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Более высокая эффективность, большая специфичность
Высокая чувствительность, хорошая совместимость

2 3


Время публикации: 22 июля 2022 г.