ДНК-полимераза Foreasy Taq
Описание
ДНК-полимераза Taq Foreasy представляет собой новый фермент Taq, экспрессируемый в инженерных бактериях Escherichia coli с помощью технологии рекомбинации генов.Сам фермент обладает определенной активностью «горячего старта» и может использоваться для обычной ПЦР и количественной ПЦР;он обладает 5'→3' ДНК-полимеразной активностью и 5'→3' экзонуклеазной активностью, но не 3'→5' экзонуклеазной активностью.
Компоненты комплекта
Компонент | ИМ-01011 | ИМ-01012 | ИМ-01013 |
ДНК-полимераза Foreasy Taq(5 ЕД/мкл) | 5000 ЕД (1 мл) | 50 КУ (10 мл) | 500 КУ (100 мл) |
2 × реакционный буфер Taq | 25 мл × 5 | 250 мл × 5 | 500 мл ×25 |
Особенности и преимущества
- Высокая специфичность: фермент обладает определенной активностью горячего старта.
- Быстрое усиление: 10 сек/кб.
- Легко адаптируемый шаблон: может использоваться для эффективной амплификации GC High value, различных трудно амплифицируемых шаблонов ДНК.
- Сильная точность: обычный Taq Enzyme 6 раз.
- Сильная термическая стабильность: его можно хранить при температуре 37 ° C в течение недели и поддерживать активность более 90%.
Применение комплекта
Различные системы ПЦР/кПЦР и системы прямой ПЦР
ПЦР-амплификация фрагментов ДНК
Маркировка ДНК
секвенирование ДНК
ПЦР А-хвост
U определение
1U: количество фермента, необходимое для включения 10 нмоль дезоксинуклеотидов в нерастворимое в кислоте вещество с использованием активированной ДНК спермы лосося в качестве матрицы/праймера в течение 30 минут при 74°C.
Условия реакции
Температура | Время | Цикл |
37°С | 5 минут | 1 |
94°С | 5 минут | 1 |
94°С | 10 секунд | 35 |
60°С | 10 секунд | |
72°С | 20 сек/кб | |
72°С | 2 минуты | 1 |
Хранилище
-20 ± 5 °С в течение 2 лет или при -80 °С при длительном хранении.
Нет сигналов усиления
1. ДНК-полимераза Taq в наборе теряет свою активность из-за неправильного хранения или истечения срока годности набора.
Рекомендация: Подтвердите условия хранения набора;повторно добавьте соответствующее количество ДНК-полимеразы Taq в систему ПЦР или приобретите новый набор для ПЦР в реальном времени для связанных экспериментов.
2. В матрице ДНК много ингибиторов ДНК-полимеразы Taq.
Предложение: повторно очистить шаблон или уменьшить количество используемых шаблонов.
3. Концентрация Mg2+ не подходит.
Рекомендация: Концентрация Mg2+ в смеси 2× Real PCR, которую мы предоставляем, составляет 3,5 мМ.Однако для некоторых специальных праймеров и матриц концентрация Mg2+ может быть выше.Таким образом, вы можете напрямую добавить MgCl2 для оптимизации концентрации Mg2+.Рекомендуется каждый раз увеличивать Mg2+ на 0,5 мМ для оптимизации.
4. Условия ПЦР-амплификации не подходят, а последовательность или концентрация праймера неверны.
Предложение: подтвердить правильность последовательности праймера и убедиться, что праймер не деградировал;если сигнал амплификации плохой, попробуйте снизить температуру отжига и соответствующим образом отрегулировать концентрацию праймера.
5. Количество шаблона слишком мало или слишком много.
Рекомендация: Выполните разбавление градиента линеаризации шаблона и выберите концентрацию шаблона с лучшим эффектом ПЦР для эксперимента ПЦР в реальном времени.
NTC имеет слишком высокое значение флуоресценции
1. Загрязнение реагентом во время работы.
Рекомендация: заменить новыми реагентами для экспериментов ПЦР в реальном времени.
2. Загрязнение произошло во время подготовки реакционной системы ПЦР.
Рекомендация: Примите необходимые меры защиты во время работы, такие как: ношение латексных перчаток, использование наконечника пипетки с фильтром и т.д.
3. Праймеры разлагаются, и разложение праймеров вызывает неспецифическую амплификацию.
Предложение: используйте электрофорез SDS-PAGE, чтобы определить, деградировали ли праймеры, и замените их новыми праймерами для экспериментов ПЦР в реальном времени.
Димер праймеров или неспецифическая амплификация
1. Концентрация Mg2+ не подходит.
Рекомендация: Концентрация Mg2+ в смеси 2× Real PCR EasyTM, которую мы предоставляем, составляет 3,5 мМ.Однако для некоторых специальных праймеров и матриц концентрация Mg2+ может быть выше.Таким образом, вы можете напрямую добавить MgCl2 для оптимизации концентрации Mg2+.Рекомендуется каждый раз увеличивать Mg2+ на 0,5 мМ для оптимизации.
2. Температура отжига ПЦР слишком низкая.
Предложение: каждый раз повышайте температуру отжига ПЦР на 1 или 2 ℃.
3. Продукт ПЦР слишком длинный.
Рекомендация: Длина продукта ПЦР в реальном времени должна составлять от 100 до 150 п.н., но не более 500 п.н.
4. Праймеры деградируют, а деградация праймеров приведет к появлению специфической амплификации.
Предложение: используйте электрофорез SDS-PAGE, чтобы определить, деградировали ли праймеры, и замените их новыми праймерами для экспериментов ПЦР в реальном времени.
5. Система ПЦР не подходит или слишком мала.
Предложение: Реакционная система ПЦР слишком мала, что приведет к снижению точности обнаружения.Лучше всего использовать реакционную систему, рекомендованную прибором количественной ПЦР, для повторного проведения эксперимента ПЦР в реальном времени.
Плохая повторяемость количественных значений
1. Прибор неисправен.
Предложение: могут быть ошибки между каждым отверстием ПЦР прибора, что приводит к плохой воспроизводимости во время управления температурой или обнаружения.Пожалуйста, проверьте в соответствии с инструкциями соответствующего инструмента.
2. Чистота образца не очень хорошая.
Рекомендация: Загрязненные образцы приведут к плохой воспроизводимости эксперимента, включая чистоту матрицы и праймеров.Лучше всего повторно очистить шаблон, а праймеры лучше всего очистить с помощью SDS-PAGE.
3. Время подготовки и хранения системы ПЦР слишком велико.
Предложение: Используйте систему ПЦР в реальном времени для эксперимента ПЦР сразу после подготовки и не оставляйте ее в стороне слишком долго.
4. Условия ПЦР-амплификации не подходят, а последовательность или концентрация праймера неверны.
Предложение: подтвердить правильность последовательности праймера и убедиться, что праймер не деградировал;если сигнал амплификации плохой, попробуйте снизить температуру отжига и соответствующим образом отрегулировать концентрацию праймера.
5. Система ПЦР не подходит или слишком мала.
Предложение: Реакционная система ПЦР слишком мала, что приведет к снижению точности обнаружения.Лучше всего использовать реакционную систему, рекомендованную прибором количественной ПЦР, для повторного проведения эксперимента ПЦР в реальном времени.